Рис. 2. Кривая диссоциации оксигемоглобина человека.
Подробнее про гемоглобин можно изучить в литературе: Коржуев П. А., Гемоглобин, М., 1964; Гауровиц Ф., Химия и функции белков, пер. с англ., 2 изд., М., 1965, с. 303 - 23; Ингрэм В., Биосинтез макромолекул, пер. с англ., М., 1966, с. 188 - 97; Рапопорт С. М., Медицинская биохимия, пер. с нем., М., 1966; Перутц М., Молекула гемоглобина, в сборнике: Молекулы и клетки, М., 1966; Цукеркандль Э.; ЭволюцияЭволюция (в биологии) - необратимое историческое развитие живой природы. Определяется изменчивостью, наследственностью и естественным отбором организмов. Сопровождается приспособлением их к условиям существования, образованием и вымиранием видов, преобразованием биогеоценозов и биосферы в целом. гемоглобина, там же; Fanelli A. R., AntoniniE., Caputo A., Hemoglobin and myoglobin, «Advances in Protein Chemistry», 1964, v. 19, p. 73 - 222; Antonini Е., Brunori M., Hemoglobin, «Annual Review of Biochemistry», 1970, v. 39, p. 977 - 1042. (Г. В. Андреенко, С. Е. Северин)
В крови взрослых людей и у многих видов животных различают типы гемоглобина, обозначаемые как HbA 1 (от англ. adult – взрослый), имеющий описанное выше типичное строение, HbA 2 и фетальный гемоглобин, HbF (от лат. fetus – плод).
HbA 2 также состоит их четырёх субъединиц: двух α– и двух β–цепей, он с меньшей скоростью мигрирует при электрофорезе, что и позволило выделить его в отдельный тип. На долю HbA 2 приходится около 2,5% от всего гемоглобина.
HbF, фетальный гемоглобин (гемоглобин новорождённых) состоит из двух α– и двух γ-цепей. Последовательность аминокислот в α– и γ-цепях окончательно ещё не расшифрована.
Фетальный гемоглобин отличается от HbA 1 не только по составу аминокислот, но и по ряду физико-хиических свойст: спектральным показателям, электрофоретической подвижности, устойчивости к щелочной денатурации и др. Гемоглобин плода обладает большим сродством к кислороду, чем гемоглобин новорожденного или взрослого. Высокое сродство к О 2 фетального гемоглобина облегчает перенос кислорода от матери к плоду. Кровь новорождённого содержит до 80% HbF, но к концу молочного периода он почти полностью заменяется заменяется на HbA (в крови взрослого однако обнаруживатеся до 1,5 HbF от общего количества гемоглобина).
Существует метод цитологической дифференцировки гемоглобина F путем обработки мазка крови лимоннокислофосфатной буферной смесью с рН = 3,4. В этих условиях эритроциты, содержащие преимущественно гемоглобин А, подвергаются гемолизу и представляются на препарате в виде теней (стром). Эритроциты, в которых преобладает гемоглобин F, оказываются резистентными и контрастно окрашиваются.
Кроме того, в период эмбрионального развития у зародыша обнаруживается так называемый примитивный гемоглобин Р, характерный для желточного кроветворения.
Он характеризуется высокой щелочной резистентностью и малой электрофоретической подвижностью. Находится в эритроцитах зародыша до 18 - недельного возраста затем сменяется фетальным гемоглобином.
* данные приводятся по Boyd J.W. , The interpretation of serum biochemistry test results in domestic animals, in Veterinary Clinical Pathology, Veterinary Practice Publishing Co., Vol. XIII, # II, 1984
На содержание гемоглобина влияет возраст, пол, порода, кормление, физические нагрузки и высота над уровнем моря.
Среднее содержание гемоглобина в эритроците.
Важным диагностическим показателем, позволяющим оценить эритропоэз и провести дифференциальную диагностику различных форм анемии, служит среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. (СГЭ) Эта величина отражает абсолютное количество гемоглобина, содержащееся в среднем в одном эритроците. Ее находят путем деления количества гемоглобина в определенном объеме крови на число эритроцитов в том же объеме.
Эритроциты с нормальным содержанием гемоглобина (26–36 пг) называютнормохромными. Если СГЭ патологически снижено, то эритроциты называют гипохромными, а если оно повышено – гиперхромными. Эти же термины употребляют и для обозначения различных форм анемии. Так, когда образование гемоглобина снижается в результате недостатка железа, содержание гемоглобина в расчете на эритроцит падает, и возникает гипохромная анемия. При других разновидностях анемии нарушается образование красных кровяных телец в костном мозгу, и в крови появляются деформированные эритроциты с высоким содержанием гемоглобина – гиперхромная анемия. После значительной кровопотери СГЭ сначала не изменяется (нормохромная анемия), а в последующем вследствие избыточной продукции эритроцитов содержание гемоглобина в них падает (гипохромная анемия).
Нормальная плазма содержит следы гемоглобина, не превышающие 10 мг%. Сильные увеличения (свыше 100 мг%) встречаются при всех гемоглобинуриях.
Измерение содержания гемоглобина.
Для измерения содержания гемоглобина существует много методов, в том числе:
1) определение количества связанного O 2 (1 г НЬ может присоединить до 1,36 мл O 2 . Количество кислорода устанавливают прибором ван-Слайка или прибором Баркрофта.)
2) анализ уровня железа в крови (содержание железа в гемоглобине составляет 0,347%);
3) колориметрия (сравнение цвета крови с цветом стандартного раствора). Гемоглобин колориметрируют как оксигемоглобин или редуцированный гемоглобин или же сперва превращают его в цветные производные (солянокислый гематин, щелочной гемоглобин, метгемоглобин, карбоксигемоглобин, циангемоглобин, азид-метгемоглобин и пр.)
4) измерение экстинкции (спектрофотометрия).
При проведении рутинных определений уровня гемоглобина отдают предпочтение последнему методу, так как при использовании первых двух способов необходима сложная аппаратура, а метод колориметрии неточен. ,
ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Гемоглобин
Гемоглобин представляет собой сложный белок, состоящий из белковой части (глобина) и небелковой пигментной группы (гема), соединённых между собой гистидиновым мостиком. В молекуле гемоглобина четыре гема. Гем построен из четырех пирроловых колец и содержит двухатомное железо. Он является активной, или так называемой простетической, группой гемоглобина и обладает способностью отдавать молекулы кислорода. У всех видов животных гем имеет одинаковое строение, в то время как глобин отличается по аминокислотному составу.
Количество гемоглобина зависит от вида животных, их возраста, породы, высоты над уровнем моря, работы, кормления.
Для количественного определения гемоглобина пользуются обычно колориметрическим способом. Принцип определения заключается в превращении гемоглобина крови в солянокислый гематин и сравнении цвета полученного с имеющимся в приборе стандартом. Прибором для определения служит гемометр Сали. Он состоит из двух запаянных пробирок со стандартной цветной жидкостью 1% раствор солянокислого гематина в глицерине), содержащей 16,67 г% гемоглобина (16,67 г на 100 мл крови). Между ними расположена градуированная пробирка, имеющая две шкалы. Одна - с делениями от 0 до 23 служит для определения гемоглобина в граммах на 100 мл крови, т. е. в грамм процентах; другая шкала с делениями от 0 до 140 показывает единицы гемоглобина (процент гемоглобина).
Ход исследования:
В градуированную пробирку, находящуюся в среднем прорезе, наливают до начала шкалы 0,1N раствор соляной кислоты. Затем из места укола на мякоти пальца пипеткой Сали набирают кровь до метки 0,02 мл (20 мм3), насасывая ее ртом через надетую на верхний конец пипетки резиновую трубочку со стеклянным мундштуком. Кончик пипетки обтирают от крови и опускают в пробирку с соляной кислотой, осторожно выдувая содержимое, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Ударяя пальцем по нижней части пробирки, тщательно размешивают кровь и оставляют ее на 5 мин. для образования солянокислого гематина. За это время набирают кровь для остальной части анализа. По истечении этого времени приливают в пробирку по каплям дистиллированную воду, размешивая стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет раствора исследуемой крови полностью сравняется с цветом стандартной жидкости. Отмечают, на каком делении находится в градуированной пробирке нижний мениск раствора крови, показывающий содержание гемоглобина в г% или единицах (процентах).
Оценка полученных данных:
Гематокрит
Гематокрит - это доля (%) от общего объема крови, которую составляют эритроциты. Гематокрит отражает соотношение эритроцитов и плазмы крови, а не общее количество эритроцитов. Например, у пациентов в состоянии шока за счет сгущения крови гематокрит может быть нормальным или даже высоким, хотя, вследствие потери крови, общее число эритроцитов может значительно снижаться. Поэтому гематокрит нельзя использовать для оценки степени анемии вскоре после потери крови или гемотрансфузии. Гематокрит может несколько снижаться при взятии крови в положении лежа. Ложно повышенные результаты могут наблюдаться при длительном сжатии вены жгутом при взятии крови. Ложное снижение гематокрита может наблюдаться вследствие разведения крови (взятие крови из той же конечности непосредственно после внутривенных введений).
Для определения гематокрита по методу Уинтроба кровь, предварительно лишенную способности свертываться, центрифугируют в течение 10 минут при 1 000 g в стандартной пробирке малого диаметра. Клетки крови , удельный вес которых выше, чем у плазмы , оседают на дно. Поскольку лейкоциты легче эритроцитов , они образуют тонкий беловатый слой между осевшими эритроцитами и плазмой. Значения гематокрита для крови, взятой из разных органов, а также для венозной, артериальной и капиллярной крови, различны. Среднее значение гематокрита вычисляют, умножая величину, полученную при определении гематокрита в крови локтевой вены по методу Уинтроба, на коэффициент 0,9.
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
ИССЛЕДОВАНИЕ СИСТЕМЫ КРОВИ
План
1. Определение гемоглобина и клиническая интерпретация результатов
2. Подсчет количества эритроцитов и клиническая оценка изменения их числа
3. Расчет индексов красной крови и их значение в дифференциальной диагностике анемий
4. Методы и клиническое значение определения количества лейкоцитов
1. Определение гемоглобина и клиническая интерпретация результатов
Для определения концентрации гемоглобина предложено довольно большое количество различных методик. Наибольшее распространение получили колориметрические, основанные на колориметрии производных гемоглобина.
Кроме этих иногда применяют газометрические методы (Hb насыщают кислородом или углекислым газом и по их количеству определяют концентрацию Hb). Также существует метод, основанный на определении железа в гемоглобине, который содержит 0,347% элемента.
В качестве унифицированного и даже стандартного метода в медицине принят цианметгемоглобиновый метод с применением ацетонангидрина. Принцип методики основан на том, что гемоглобин окисляется в метгемоглобин (гемиглобин) под действием железосинеродистого калия (красной кровяной соли). Образующийся с ацетонангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемоглобинцианид) определяют на фотоэлектроколориметре, спектрофотометре или гемоглобинометре.
При определении гемоглобина этим методом 0,02 мл (20 мкл) крови (стабилизированной или свежеполученной) вносят в 5 мл трансформирующего раствора, который состоит из ацетонциангидрина, железосинеродистого калия и гидрокарбоната натрия. Раствор хорошо перемешивают, оставляют на 10 мин, после чего колориметрируют при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против «холостой пробы» (трансформирующий раствор). Расчет производят по колибровочному графику.
Наиболее простым и также достаточно широко распространенным в лабораторной практике является колориметрия солянокислого гематина, на котором основан метод Сали (1895 г.). Для этого необходим гемометр, представляющий собой штатив, в котором имеются три пробирки. В крайних пробирках находится стандарт и они запаяны, средняя пробирка имеет градуировку. В нее, до нижней метки наливают 0,1 н раствор соляной кислоты, затем вносят 0,02 мл стабилизированной крови. Для того, чтобы эритроциты полностью разрушились, ждут 5 мин. (при исследовании крови млекопитающих) или 10 мин. (при исследовании крови птиц). Гемоглобин, взаимодействуя с HCl, превращается в солянокислый гематин, имеющий темно-коричневый цвет. Затем в пробирку приливают по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока проба по цвету не будет соответствовать стандарту. Результат считывают по шкале, нанесенной на пробирку.
Метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. При суммировании различных погрешностей этого метода ошибка составляет +30%. Поэтому в настоящее время метод не может быть рекомендован для лабораторной практики.
У здоровых животных концентрация гемоглобина составляет (г/л): крупный рогатый скот - 100-130; овца - 90-133; коза - 100-150; лошадь - 80-140; свинья - 90-110; собака - 110-170.
Увеличение концентрации гемоглобина называется гиперхромемия. Наблюдается при диарее, рвоте, гипергидрозе, образовании экссудатов и транссудатов, миоглобинурии, эмфиземе легких. Гипохромемия (олигохромемия) или уменьшение количества гемоглобина чаще регистрируется при анемии. При этом следует иметь ввиду, этот симптом является типичным для т.н. дефицитных форм анемии (недосточность железа, витамина В 12 , ферментов идр.).
Определение концентрации гемоглобина имеет также прогностическое значение. Прекращение снижения или постепенное повышение концентрации гемоглобина является благоприятным симптомом, уменьшение же его количества до 50 г/л - это неблагоприятный признак. Выявление показателя в 30 г/л является угрожающим для жизни животного симптомом.
ГЕМАТОКРИТ
Гематокрит представляет собой объемную фракцию эритроцитов в цельной крови. Зависит от количества эритроцитов и их объема. В современных гематологических анализаторах показатель гематокрита устанавливается расчетным методом -- по параметрам, выводимым из количества эритроцитов и их объема.
В норме гематокрит составляет 0,40-0,50 л/л крови; у новорожденных несколько выше.
Биологическим материалом для исследования служит венозная или капиллярная кровь. Венозная кровь берется с трилоном Б (ЭДТА); капиллярная собирается в гематокритный капилляр, обработанный гепарином.
Повышение гематокрита может быть связано либо с гиперпродукцией эритроцитов, либо с увеличением их размера.
Показатель гематокрита увеличивается при: эритроцитозах;
полицитемии -- заболевании, связанном с усилением продукции клеток «красной» крови;
компенсаторной реакции, направленной на улучшение снабжения тканей кислородом, например, у больных, страдающих хроническими заболеваниями легких, легочной недостаточностью, тяжелыми пороками сердца, при нахождении на больших высотах, при почечной патологии (сужении почечных артерий, вызывающем недостаточное кровоснабжение и гипоксию ткани почек;
заболеваниях самих почек при образовании в почках полостей, заполненных жидкостью; новообразованиях почек, сопровождающихся усилением образования эритропоэтина. При всех этих состояниях усиливается выработка в почечной ткани особого вещества -- эритропоэтина, способствующего повышению продукции эритроцитов костным мозгом, возрастанию гематокрита. Его увеличение происходит и при беременности.
Увеличение гематокрита относительного характера наблюдается при обезвоживании организма, вызванном разными причинами, в том числе: перемещением жидкости в кишечник (при его непроходимости); потерей содержимого желудочно-кишечного тракта при неукротимой рвоте, профузных поносах (сопровождается сгущением крови, а следовательно, и увеличением гематокрита), чрезмерном потоотделении, ожоговой болезни, перитоните;
нахождении на больших высотах.
Уменьшение содержания эритроцитов и показателя гематокрита может наблюдаться при:
потере крови (острых кровотечениях);
снижении темпа образования эритроцитов в костном мозге;
ускоренном разрушении красных кровяных телец;
увеличении объема крови при нормальном содержании в ней эритроцитов (например, после внутривенного введения жидкости больным со сниженной выделительной функцией почек); анемии;
увеличенном объеме циркулирующей плазмы при беременности (особенно во второй половине); гиперпротеинемии; гипергидратации.
2. Подсчет количества эритроцитов и клиническая оценка изменения их числа
Эритроциты, также как лейкоциты и тромбоциты относятся к форменным элементам крови. Эритроциты - самые многочисленные форменные элементы крови, которые содержат гемоглобин. Следовательно, их основная функция в организме - осуществление газообмена. С помощью гемоглобина эритроциты переносят кислород и углекислоту. Кроме того, эритроциты доставляют клеткам аминокислоты и липиды, принимают участие в регуляции кислотно-щелочного равновесия, выполняют защитную и другие жизненно важные функции, которые более подробно рассматривали в курсе физиологии.
Содержание эритроцитов в крови здоровых животных и птицы довольно постоянное, поэтому установление изменения их количества имеет диагностическое значение. Правда, колебания их числа можно наблюдать в зависимости от времени суток исследования, возраста, пола, продуктивности, физической нагрузки животного. Так, например, количество эритроцитов днем несколько меньше чем вечером, у новорожденных их содержание выше чем у взрослых, также как и у самцов по сравнению с самками. У высокопродуктивных коров показатели содержания эритроцитов выше чем у малопродуктивных. Установлено также, что у лошадей после физической нагрузки (например 10- минутная прогонка рысью - проба по Домрачеву) число эритроцитов увеличивается на 20 и более процентов.
Все эти факторы необходимо учитывать при клинической оценке результатов определения количества эритроцитов. Для подсчета эритроцитов предложено несколько методов, из которых унифицированными в медицинской практике являются два:
1. Подсчет в счетной камере с применением микроскопа;
2. Подсчет посредством электронных автоматических счетчиков. Ранее практиковались методы определения числа эритроцитов с помощью эритроседиометра (градуированной пробирки для определения СОЭ по Неводову), эритрогемометра и фотоэлектроколориметра, однако, из-за низкой их точности, в настоящее время они не используются. Погрешность же метода подсчета форменных элементов в камере составляет + 2-5%, а в автоматических анализаторах и того меньше - до + 2%. Это и предопределяет широкое применение названных методов не только в лабораторной практике, но и в научных исследованиях.
Подсчет эритроцитов в камере. Принцип метода заключается в том, что точное количество крови равномерно смешивают с определенным количеством жидкости. Разведенную кровь помещают в камеру с известным объемом. На дно камеры нанесена сетка, благодаря которой возможен точный подсчет эритроцитов посредством микроскопии.
Предложено несколько счетных камер, из которых наибольшее распространение в странах бывшего СССР получила счетная камера с стекой Горяева. Ее нередко так и называют "камера Горяева", хотя фактически это камера Бюркера с сеткой Горяева (1910).
Счетная камера - это толстое предметное стекло с четырьмя поперечными желобками, между которыми расположены три плоскости. Средняя плоскость на 0,1 мм тоньше боковых и разделена продольным желобом на две равные половины, на каждой из которых выгравирована сетка Гряева. Если на боковые плоскости камеры наложить покровное стекло и притереть его до появления радужных колец, т.н. "колец Ньютона", то над средней плоскостью будет щелевидное пространство высотой 1/10 мм.
Сетка Горяева имеет размер 3x3 мм, т.е. ее площадь равна 9 мм 2 . На ней нанесено 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 маленьких, 100 квадратов не разграфлено и еще 100 разделены на прямоугольники. Площадь одного маленького квадратика составляет 1/400 мм, а объем камеры над ним - 1/4000 мм.
Что касается техники подсчета эритроцитов, то здесь соблюдают следующую последовательность этапов: 1) разведение крови; 2) заправка счетной камеры; 3) собственно подсчет клеток; 4) расчет абсолютного количества эритроцитов.
1 этап. Поскольку эритроцитов в крови содержится значительное количество, например у коровы массой 400 кг - более 125 млрд. клеток, то определить их количество возможно только после разведения крови. Для разведения чаще применяют 0,85-3%-й раствор натрия хлорида или 5%-й раствор натрия цитрата. Применение растворов большей или меньшей концентрации недопустимо, поскольку приведет к разрушению эритроцитов.
Кровь разводят или в меланжере-смесителе для эритроцитов, или в пробирке (по Н.М.Николаеву, 1954). Меланжер представляет собой капиллярную трубочку длиной 10 см с шаровидным расширением. Внутри расширения находится шарик, который способствует равномерному перемешиванию крови и жидкости. Поскольку предложены меланжеры как для эритроцитов, так и для лейкоцитов, то цвет этого шарика может быть различным: красный шарик - это меланжер для эритроцитов, белый - для лейкоцитов.
Для исследования используется как стабилизированная кровь, так и не- стабилизированная сразу же после взятия. Кровь набирают в меланжер до метки "0,5" или "1". Конец смесителя очищается ваткой от крови и сразу же набирается до метки "101" разбавляющая жидкость. Отверстия смесителя закрывают большим и средним пальцами и перемешивают в течение 2-3 мин., после чего удаляют на вату первые три капли, а четвертую вносят в счетную камеру. Если кровь набирали до метки "0,5", то получают разведение в 200 раз, если до "1" - в 100 раз.
При пробирочном способе разведения крови берут 4 мл раствора натрия хлорида и вносят в пробирку. Капилляром от гемометра Сали набирают 0,02 мл крови и выдувают в пробирку, затем несколько раз промывают капилляр раствором. Разведенную при этом в 200 раз кровь тщательно перемешивают.
2 этап. Камеру располагают горизонтально и заполняют так, чтобы вся поверхность, на которую нанесена сетка, была заполнена жидкостью. При этом не должно быть образования пузырьков воздуха. После заполнения камеру оставляют строго в горизонтальном положении в течение 1 минуты для оседания эритроцитов на дно.
3 этап. Подсчет эритроцитов проводят под микроскопом, лучше при среднем увеличении (объектив х40, окуляр х7) при несколько затемненном поле, чтобы лучше просматривались линии сетки. Учет клеток ведется в пяти больших квадратах, разделенных на 16 малых. Начинают подсчет с верхнего левого большого квадрата сетки. Затем переходят к следующему квадрату, расположенному по диагонали, затем аналогично к следующему и т.д. Есть и другой принцип подсчета - в 4-х квадратах по углам ив 1-м квадрате в центре сетки.
Подсчет клеток в большом квадрате начинают с верхнего левого малого квадратика. Затем переходят ко второму, третьему и четвертому квадратику того же ряда. Сосчитав клетки первого ряда, переходят на второй и считают в обратном порядке. Таким образом подсчитывают эритроциты во всех 16 малых квадратиках и переходят к следующему большому квадрату.
Чтобы избежать повторного учета эритроцитов в большом квадрате существует два правила их подсчета:
1) подсчитываются все эритроциты, лежащие внутри квадрата и на его левой и верхней линиях. Клетки, лежащие на правой и нижней линиях, подсчитываются с другими квадратами. В крайних правых квадратах как верхних, так и нижних, клетки, лежащие на правой и нижней линиях, подсчитываются с последними квадратами. Этот метод предусматривает подсчет только тех клеток, которые лежат внутри квадратов, на линиях и прилегают к ним с внутренней стороны. Эритроциты, лежащие вне квадрата не учитываются.
2) второй метод предусматривает подсчет в том же порядке, но отличается от первого тем, что учитываются клетки, прилегающие к линиям не только изнутри, но и снаружи. Подсчет эритроцитов при этом ведется без учета таковых, прилегающих к правым и нижним линиям. По мнению большинства исследователей первый метод является более точным.
4 этап. Расчет абсолютного количества эритроцитов производится по формуле:
Где X - количество эритроцитов в 1 мкл крови;
А - количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах;
Б - степень разведения крови (200);
В - количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах (80);
Таким образом, формула имеет вид: X = А10000. Например, в 5 квадратах количество эритроцитов 590, тогда в абсолютных единицах получаем 5 900 000 клеток в 1 мкл крови. Для пересчета количества клеток в 1 л (сист. ед. СИ) необходимо результат умножить на 106, т.е. 5 900 000 10= 5,9.10 12 /л.
Подсчет эритроцитов посредством электронных автоматических счетчиков. Эти методы получают все большее распространение, поскольку позволяют автоматизировать исследование, повышают его точность и исключают субъективизм. Используются различные кондуктометрические счетчики, из которых наиболее известные типы это Культер (Франция), Целлоскоп (Швеция), Пикоскел (Венгрия) и др. Принцип работы таких счетчиков основан на различии электропроводности форменных элементов крови и жидкости, в которой они находятся. При этом клетки, проходя через микроотверстие капиллярной трубки, изменяют сопротивление электрической цепи, что регистрируется электромагнитным устройством. Число эритроцитов через 15-30 с высвечивается на цифровом табло.
В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество эритроцитов: крупный рогатый скот - 5,0-7,5; овцы - 7,0-12,0; козы - 12-18; лошади - 6,0-9,0; свиньи - 6,0-7,5; собаки - 5,2-8,4; куры - 3,0-4,0 на 10 /л.
Уменьшение числа эритроцитов (эритроцитопения, олигоцитемия) отмечается наиболее часто при анемиях различного происхождения (постгеморрагических, гемолитических, железо- и витаминодефицитных, гипо- и апластических, которые связаны с нарушением кроветворения). Эритроцитопения развивается также при инфекционной анемии лошадей, гематурии крупного рогатого скота, при многих острых и хронических интоксикациях.
Увеличенное содержание эритроцитов в крови - эритроцитоз (полицитемия) наблюдается чаще при заболеваниях, связанных с потерей организмом жидкости, в частности при диспептическом неонатальном и диарейном синдромах. Она бывает в начальную стадию инфекционных и лихорадочных заболеваний, при болевом абдоминальном синдроме, при пороках сердца в стадию декомпенсации, при отравлении фосфором, ртутью, окисью углерода, альвеолярной эмфиземе легких.
ЦП дает представление об отношении концентрации гемоглобина к количеству эритроцитов. Метод определения основан на сравнении полученных результатов с нормативными показателями здоровых животных.
ЦП рассчитывается по формуле:
ЦП = Hb2.E1/Hb1.E2,
где гемоглобин 1 и эритроциты 1 - это средние показатели у здорового животного данного вида и возраста; гемоглобин 2 и эритроциты 2 - это найденные показатели у исследуемого животного. Например:
У всех здоровых животных ЦП равен 1+0,15, т.е. пределы колебаний составляют от 0,85 до 1,15.
Для определения средней насыщенности эритроцитов гемоглобином рассчитывают еще один индекс: СГЭ. При этом руководствуются формулой:
СГЭ = Hb (г/л):Е (10/л).
СГЭ равно: у крупного рогатого скота - 15-20; свиней - 16-19; лошадей 17-20 пг.
Определение индексов красной крови имеет значение в дифференциальной диагностике анемий. При подострой постгеморрагической анемиии, когда одновременно уменьшается содержание гемоглобина и количество эритроцитов, ЦП приближается к 1, а СГЭ такое же как и у здоровых животных. ЦП меньше единицы и снижение СГЭ, или гипохромия, бывает при алиментарной, а также при хронической посгеморрагической анемии. Для этих нозологических форм анемии симптом гипохромии является типичным. Гиперхромия, это когда ЦП больше единицы и увеличивается СГЭ, - характерный признак гемолитической анемии, поскольку значительно уменьшается количество эритроцитов.
острой или хронической кровопотери, либо усиленного разрушения крови (гемолиз), либо нарушения образования эритроцитов в костном мозге. При многих болезнях и патологических состояниях анемия, ее глубина и характер является ведущим синдромом и определяет прогноз заболевания.
Симптомы анемии: бледность слизистых оболочек и кожи; одышка; тахикардия со стучащим сердечным толчком; гипохромемия (олигохромемия), эритроцитопения (олигоцитемия), увеличение СОЭ. При глубокой анемии может развиться коллапс. Тяжелая гемолитическая анемия проявляется гемоглобинурией.
Анемическим синдромом у животных проявляются следующие патологические состояния и болезни: наружные и внутренние, острые и хронические кровотечения; отравления гемолитическими ядами и интоксикации; гемоспоридиозы; дефицит или нарушения усвоения железа, гиповитаминозы; нарушения эритропоэза; аутоиммунные и инфекционные заболевания с геморрагическим синдромом (см.), лучевая болезнь. Анемия развивается также при недостаточном кормлении животных.
Полицитемический синдром - патологическое состояние, характеризующееся увеличением количества форменных элементов в единице объема крови. Поскольку большая часть массы форменных элементов приходится на эритроциты, такое состояние нередко именуют эритремией, хотя этот термин правомочен лишь по отношению к системным абсолютным и первичным эритроцитозам, обусловленным патологией эритроидного ростка костномозгового кроветворения. Абсолютные эритроцитозы бывают обусловлены гипоксией, стенозом легочной артерии, метгемоглобинемией. Относительные (временные) эритроцитозы связаны с потерей организмом жидкости, стрессом, системной артериальной гипертензией, повышенной физической нагрузкой.
Симптомы полицитемического синдрома: темно-вишневая окраска слизистых оболочек, кровоизлияния; эритро- и лимфоцитоз; замедление СОЭ (у рогатого скота практически отсутствует); гепатомегалия у крупного рогатого скота, спленомегалия у лошадей.
гемоглобин лейкоцит эритроцит анемия
4. Методы и клиническое значение определения количества лейкоцитов
Лейкоциты, или белые кровяные тельца, в организме выполняют прежде всего защитную функцию. В зависимости от форм они участвуют в фагоцитозе, выработке интерферона, лизоцима, гистамина и других биологически активных веществ. Лимфоциты играют основную роль в специфических защитных реакциях - формировании клеточного и гуморального иммунитета.
Для подсчета лейкоцитов предложены два метода:
1. Подсчет в счетной камере (ошибка метода +7%).
2. Подсчет в автоматических счетчиках (ошибка +2%).
При подсчете лейкоцитов используют ту же камеру с сеткой Горяева, что и для эритроцитов. Разводят кровь жидкостью Тюрка в меланжере или в пробирке. Состав жидкости Тюрка: 100 мл 3%-го р-ра уксусной к-ты и 1 мл 1%-го р-ра генциан фиолетового или метиленового синего. Ее назначение состоит в том, чтобы разрушить эритроциты и окрасить лейкоциты.
При разведении в меланжере набирают кровь в смеситель для лейкоцитов до метки "0,5" или "1", а до метки "11" - жидкость Тюрка и перемешивают в течение 2-3 мин. Получают разведение соответственно в 10 или 20 раз. Для разведения пробирочным методом в пробирку отмеривают 0,4 мл жидкости Тюрка и в нее вносят 0,02 мл крови, которую набирают капилляром Сали. Содержимое пробирки тщательно перемешивают.
Заполнение счетной камеры проводят также как и при подсчете эритроцитов. Через 1-2 мин., после оседания лейкоцитов на дно камеры, проводят подсчет лейкоцитов в 100 больших неразграфленных квадратах. Расчет абсолютного количества клеток производят по формуле:
X = А.Б/В.Г,
Где X - количество лейкоцитов в 1 мкл крови;
А - количество лейкоцитов, подсчитанное в 100 больших квадратах;
Б - степень разведения крови (20);
В - количество маленьких квадратиков в 100 больших квадратах (1600);
Г - объем счетной камеры над маленьким (1/4000 мм3).
Таким образом, формула имеет вид:
Например, подсчитано 180 лейкоцитов, тогда в абсолютных единицах получаем 9 000 клеток в 1 мкл крови. Для пересчета количества клеток в 1 л (сист. ед. СИ) необходимо результат умножить на 10 6 , т.е. 9 000*10 6 = 9*10%.
Принцип подсчета лейкоцитов посредством автоматических счетчиков такой же как и при определении числа эритроцитов.
В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество лейкоцитов: крупный рогатый скот - 4,5-12,0; овцы - 6,0-14,0; козы - 8,0-17,0; лошади - 7,0-12,0; свиньи - 8,0-16,0; собаки - 8,5-10,5; куры - 20,0-40,0 на 10 9 /л.
Увеличение количества лейкоцитов в крови - лейкоцитоз - может быть физиологическим, медикаментозным и патологическим. Физиологический лейкоцитоз бывает при беременности, после физических нагрузок, после приема корма у плотоядных, при стрессе. Медикаментозный лейкоцитоз наблюдается после парентерального введения животным белковых препаратов, вакцин, сывороток, алкалоидов и т.д.
Патологический лейкоцитоз отмечается при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих целый ряд внутренних болезней: бронхопневмонию, пневмонию, плеврит, перикардит, ретикулоперитонит и др. Выраженный лейкоцитоз наблюдается при многих инфекционных болезнях, лейкозах, хирургической инфекции. Возникает он и при отравлении животных ртутью, мышьяком, передозировке камфары.
Снижение числа лейкоцитов - лейкцитопения - является результатом угнетения органов кроветворения, их истощения, пониженной реактивности организма. Лейкоцитопения развивается в результате инфекционных заболеваний (классическая чума свиней, инфекционный энцефаломиелит лошадей, сальмонеллез, стахиботриотоксикоз и др.), радиационных поражений, передозировки препаратов (сульфаниламидов, левомецитина, синтомицина и др.). Выявление лейкоцитопении при заболеваниях, для которых характерен лейкоцитоз, указывает на сниженную естественную резистентность организма и тяжелое течение болезни.
Размещено на Allbest.ru
Подобные документы
Клиническое обследование коровы, состояние основных органов и систем. Анализ состояния зубов животного. Снижение количества эритроцитов и гемоглобина по результатам лабораторного исследования крови. Причины увеличения надвыменных лимфатических узлов.
курсовая работа , добавлен 24.03.2013
Форменные элементы крови: эритроциты, лейкоциты, гемоглобин, гематокрит. Методика подсчёта количества эритроцитов в единице объёма крови в камере Горяева, техника взятия крови. Функции: трофическая, экскреторная, респираторная, защитная, коррелятивная.
практическая работа , добавлен 09.10.2009
Группы крови крупного рогатого скота как основа селекционного процесса. Тестирование типов крови и их использование для определения линий и пород. Использование иммуногенетического мониторинга и биотехнологии трансплантации эмбрионов в воспроизводстве.
курсовая работа , добавлен 02.08.2010
Проектирование и анализ кормового рациона для спортивной лошади. Основная роль железа в организме. Сущность эритроцитов, лимфоцитов и гемоглобина. Характеристика эффективного использования имеющихся кормовых ресурсов в личных подсобных хозяйствах.
контрольная работа , добавлен 29.03.2015
Стресс-факторы и их влияние на физиологическое состояние и состав крови животных. Показатели осеменения коров. Повышение резистентности организма и биохимические показатели крови после лечения. Результаты экономической эффективности лечебных мероприятий.
дипломная работа , добавлен 04.05.2009
Основные функции крови: трофическая (питательная), экскреторная (выделительная), респираторная (дыхательная), защитная терморегулирующая, коррелятивная. Плазма крови, белки плазмы, небелковые азотсодержащие соединения, безазотистые органические вещества.
практическая работа , добавлен 09.10.2009
Воздействие имуномодулятора на показатели периферической крови глубокостельных коров. Нахождение эффективного метода коррекции естественной резистентности организма и внутриутробно развивающегося потомства. Воздействие тимогена на организм коров.
статья , добавлен 15.12.2009
Система органов крово- и лимфообращения, или сосудистая система. Общая характеристика кровоснабжения отдельных органов. Составные компоненты крови и их основные функции. Лимфатическая система млекопитающих животных. Ход и строение лимфатических сосудов.
реферат , добавлен 19.06.2014
Профилактика незаразных болезней. Экологические основы диспансеризации. Объем и сроки диспансерного обследования сельскохозяйственных животных. Анализ условий кормления и содержания животных. Лабораторный анализ крови, мочи, молока, рубцового содержимого.
курсовая работа , добавлен 19.12.2015
Отравление животных растениями, содержащими органические кислоты и соли, понижающими свертываемость крови, фото-сенсибилизирующими, нарушающими углеводный обмен. Клинические признаки, патологоанатомические изменения, токсикодинамика и профилактика.
Гемоглобин (Нb) составляет около 95 % белка эритроцитов. Один эритроцит содержит 280 млн молекул гемоглобина. Hb относится к сложным белкам - хромопротеидам. В его состав входит железосодержащая простетическая группа — гем (4 %) и простой белок типа альбумина — глобин (96 %).
Молекула Hb - тетрамер, состоящий из 4 субъединиц - полипептидных цепей глобина (2 цепи α и 2 цепей β, γ, δ, ε, ζ в разных комбинациях), каждая из которых ковалентно связана с одной молекулой гема. Гем (небелковая пигментная группа) построен из 4 молекул пиррола, образующих порфириновое кольцо, в центре которого находится атом железа (Fe2+). Основная функция Hb - перенос O2.
Синтез Hb происходит на ранних стадиях развития эритробластов. Синтез глобина и гема протекает в эритроидных клетках независимо друг от друга. У всех видов животных гем одинаков; различия свойств Нb обусловливаются особенностями строения белковой части его молекулы, т. е. глобина.
У взрослого человека в норме в крови содержится три типа гемоглобина: НbА (96-98 %); НbА2 (2-3 %) и НbF (1-2 %). Глобин человека состоит из 574 остатков различных аминокислот, образующих четыре попарно одинаковые полипептидные цепи: две α-цепи — по 141 аминокислотному остатку и две β-цепи — по 146 остатков аминокислот. Общая формула молекулы гемоглобина человека — НbА-α2β2.
В состав НbА2 входят две α и две δ-цепи (α2δ2), а НbF — две α- и две γ-цепи (α2γ2). Синтез цепей гемоглобина обусловливается структурными генами, ответственными за каждую цепь, и генами-регуляторами, осуществляющими переключение синтеза одной цепи на синтез другой.
На ранних стадиях эмбриогенеза (с 19-го дня по 6-ю неделю) синтезируются в основном эмбриональные гемоглобины - HbP (Гоуэр1 (ξ2ε2), Гоуэр2 (α2ε2) и Портлад (ξ2γ2)).
В течение указанного времени кроветворение постепенно переключается с желточного мешка на печень. При этом выключается синтез ξ- и ε-цепей и включается синтез γ-, β-, δ-цепей. К 4-му месяцу эритроциты печеночного происхождения доминируют в циркулирующей крови и содержат фетальный гемоглобин (HbF).
Гемоглобины различаются по биохимическим, физико-химическим, иммунобиологическим свойствам. Так, НbF по сравнению с НbА более устойчив к щелочам, менее — к температурным влияниям, обладает более высоким сродством к кислороду и способен быстрее отдавать углекислоту. К моменту рождения имеются оба типа Нb (НbF и НbА). Затем «фетальный» Нb постепенно сменяется «взрослым». Иногда у взрослых может обнаруживаться минимальное (до 2 %) количество НbF, что не имеет патологического значения.
При мутациях в структурных генах, контролирующих синтез Нb, когда заменяются аминокислоты, в полипептидных цепях глобина образуются аномальные гемоглобины.
Известно более 400 аномальных Нb, для которых характерны нарушения первичной структуры той или иной полипептидной цепи НbА (гемоглобинопатии, или гемоглобинозы). Основными видами таких Hb являются:
- серповидно-клеточный гемоглобин (НbS) — возникает при замене глютаминовой кислоты на валин в β-цепи; в этом случае развивается серповидно-клеточная анемия;
- метгемоглобины (около 5 разновидностей) образуются, если гистидин заменяется на тирозин; в этом случае окисление Нb в метгемоглобин, постоянно происходящее в норме, становится необратимым.
Количество гемоглобина в крови является важным клиническим показателем дыхательной функции крови. Оно измеряется в граммах на литр крови:
Лошади - в среднем 80-140 г/л,
КРС - 90-120 г/л,
Свиньи - 90-110 г/л,
Овцы - 70-110 г/л,
Птицы - 80-130 г/л,
Пушные звери - 120-170 г/л,
Человек - 120-170 г/л.
Формы гемоглобина:
Оксигемоглобин - соединение с O2.
Карбогемоглобин (HbCO2) - соединение с CO2.
Метгемоглобин (MetHb) - Hb, содержащий Fe гема в трёхвалентной форме (Fe3+); не переносит О2. Образуется в результате воздействия на эритроциты сильных окислителей (нитраты, нитриты, парацетамол, никотин, сульфаниламиды, лидокаин).
Карбоксигемоглобин - соединение с CO.
Гликозилированный Hb - Hb, модифицированный ковалентным присоединением к нему глюкозы (норма 5,8-6,2%). К одним из первых признаков сахарного диабета относят увеличение в 2-3 раза количества гликозилированного Hb.
Солянокислый гематин - результат взаимодействия ферментов и соляной кислоты желудочного сока с Hb. Окрашивает дно эрозий и язв в коричневый цвет и придаёт рвотным массам при желудочном кровотечении вид «кофейной гущи».
Кристаллы гемоглобина у животных имеют видовые особенности, что используется для идентификации крови или её следов в судебной ветеринарии и медицине (солянокислый гематин в пробе Тейхмана).
Гемоглобин высоко токсичен при попадании значительного его количества из эритроцитов в плазму крови (что происходит при массивном внутрисосудистом гемолизе, геморрагическом шоке, гемолитических анемиях, переливании несовместимой крови и других патологических состояниях). Токсичность гемоглобина, находящегося вне эритроцитов, в свободном состоянии в плазме крови, проявляется тканевой гипоксией — ухудшением кислородного снабжения тканей, перегрузкой организма продуктами разрушения гемоглобина — железом, билирубином, порфиринами с развитием желтухи, закупоркой почечных канальцев крупными молекулами гемоглобина с развитием некроза почечных канальцев и острой почечной недостаточности.
Ввиду высокой токсичности свободного гемоглобина в организме существуют специальные системы для его связывания и обезвреживания. Например, особый плазменный белок гаптоглобин, специфически связывающий свободный глобин и глобин в составе гемоглобина. Комплекс гаптоглобина и глобина (или гемоглобина) затем захватывается селезёнкой и макрофагами тканевой ретикуло-эндотелиальной системы и обезвреживается.
